SM06 蛋白质动态结构超快时间分辨光谱研究

中科院物理所-软物质SM06组

Bruker傅里叶变换红外光谱仪

 

      傅里叶变换红外光谱仪(Fourier Transform Infrared Spectrometer,FTIR)是现在比较通用的一种测量稳态红外光谱的仪器。对蛋白质二级结构的研究来说,由于存在大量已知蛋白质样品的光谱数据可供参考,可进行未知蛋白质的二级结构的指认和相应的热稳定性分析,并对脉冲升温瞬态红外光谱峰位的指认及相应二级结构动力学的分析起到辅助性的作用。

      FTIR 光谱仪的组成部分主要包括红外光源(如SiC 棒)、迈克尔逊干涉仪、样品室、探测器和控制电路。其工作原理基于迈克尔逊干涉仪,分别得到背景和样品的干涉图后,再经过傅里叶变换得到背景和样品单通道谱,最后经数学处理得到样品的透射或吸收光谱图。

      Vertex 70V 是一台真空型红外光谱仪,在测试固体样品时,能有效地防止空气中的H2O 和CO2 对红外光谱的干扰,但不适用于液体样品的测试。在测试液体样品时,只能使用干燥氮气吹扫样品室,以避免水汽对红外光谱的影响。经过测试,我们认为,由于H2O 恰好在蛋白质酰胺I 带有特征吸收,氮气吹扫的方法并不能完全避免H2O 对蛋白质酰胺I 带光谱的干扰,所以我们对样品室进行了改造,改造之后可在真空度高于1 Pa 的条件下测量蛋白质水溶液样品的稳态和瞬态红外光谱。在测量变温稳态红外光谱时,我们引入水浴温度控制,样品温度在0–100oC 之间可调,控温精度达±0.1oC。我们利用该套装置进行了热休克蛋白DegP、高等植物捕光天线复合物LHCII 和牛眼晶状体蛋白的变温红外光谱实验,取得了良好的实验结果。

 

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